白细胞范文

导语：怎么才干写好一篇白细胞，这就需求搜集收拾更多的材料和文献，欢迎阅览由好用生活网收拾的十篇范文，供你学习。

篇1

要害词： 白细胞 血型 抗原 造血干细胞

白细胞抗原,Human Lecucyte Antigen，HLA，俗称白细胞血型，一般是相关于红细胞血型而言。一般输血时红细胞血型,ABO血型和Rh血型契合就能够了，但关于骨髓移植、造血干细胞及器官移植，有必要白细胞血型契合。［1］

与红细胞血型比较，人们对白细胞血型的了解较晚。20世纪50年代，美国免疫学家斯奈尔发现了安排相容性。1958年法国免疫学家多塞在人体内发现了首要安排相容性复合体――人体第一个白细胞抗原Mac，即人体白细胞血型，这标志着HLA研讨的开端。［2，3］从1958年到1999年的人类基因组计划，HLA的研讨阅历了一个绵长的进程。

现在，在分子水平上已完结HLA序列的测定，并对其基因表达产品在机体内的效果方式及进程进行了深化的研讨。作为单个安排细胞的遗传标志，HLA不仅在抗原辨认、递呈，免疫应对与调控等方面起着十分重要的效果，并且因为HLA不同基因座之间连锁不平衡而产生高度的遗传多态性。［4］据悉，现在世界上已发现HLA等位基因2500余个。新HLA等位基因的发现不光能够在器官、骨髓移植方面协助患者找到更适宜的供体，削减排挤反响的产生，进步移植成功率，并且将有助于说明某些疾病的发病机制，并在此根底上制定全新的防治办法。［5］该研讨对白细胞血型的进行了总述，旨在为白细胞血型研讨供给一些理论依据和为器官移植供给理论支撑。

1. 白细胞血型

MHC是表达于脊椎动物有核细胞外表的一类高度多态、严密连锁的基因群，因其编码的蛋白质产品,首要安排相容性抗原在安排相容性的决议中起首要效果而得名。小鼠的MHC称为H-2体系，人的MHC存在于白细胞外表，含量最多，收集外周血白细胞查验，称之为人类白细胞抗原体系(HLA体系)。它是人类基因组中最杂乱、多态性最高的遗传体系，其首要功用为参加自我辨认、调理免疫反响和对异体移植的排挤效果。

HLA体系坐落人类第6染色体短臂,6p21.31，全长3600kb，包含128个功用基因和96个假基因，等位基因总数超越500多个。HLA复合体代表一组亲近连锁的基因群，一切基因均为共显性。HLA作为人类白细胞抗原中最重要的一类，是人类首要安排相容性抗原，在白细胞上表达最强。HLA抗原是一种糖蛋白,含糖为9％，由4条肽链组成,含2条轻链和2条重链，重链上衔接2条糖链。HLA分子部分镶嵌在细胞膜的双脂层中，其刺进膜的部分相当于免疫球蛋白IgG的Fc区段，轻链为β-微球蛋白。因为分子结构上的相似，故HLA与免疫防护体系亲近相关。［6，7］

2. 命名与分类

第十届世界安排相容性评论会经过了HLA的命名规范，HLA命名一般以大写字母A、B、C等标明HLA遗传区域中的座

位。HLA抗原特异性用数字标明。HLA-C抗原特异性以Cw为字首命名。HLA基因命名一般以4位数字标明，其间前2位数字标明对应最附近的HLA抗原特异性，后2位数字则用于标明亚型的等位基因。假如呈现第五位数字，则代表“缄默沉静替代”。第6、7位数字代表相应的发动子,包含内含子或侧翼区等序列的多态性。结尾加英文字母N标明无效等位基因或不表达基因。在不能区别等位基因时，可答应取最前面的2位或4位数字标明该HLA的特异性。

现已发现的HLA抗原体可分为A、B、C、D和DR等5个系列。每一个人都带有每个系列上的两个抗原。依据结构和散布特征，HLA可分为两类：即I类抗原和Ⅱ类抗原。HLA-A、B、C属I类抗原，分子量为56000，由一条重肽链和一条轻肽链所组成，分为多肽结合区、免疫球蛋白样区、跨膜区和胞内区，其抗原特异性是由重肽链上氨基酸列所决议的。它们除散布于白细胞和血小板，还广泛散布在各种正常安排器官和肿瘤安排的有核细胞膜。其他的HLA抗原即D、DR、DP和DQ归于Ⅱ类抗原，由α链和β链组成的异源二聚体，相同分四个区。分子量为63000，它们只散布在B细胞、巨噬细胞、单核细胞和内皮细胞。［8，9］

3. 白细胞血型的运用

3.1器官移植的安排配型

器官移植时要先测定供体和受体两方面的安排型别，只要型别附近的单个间才干到达成功的移植。HLA测定是最简洁和有用的安排配型办法。

3.2亲子断定

HLA受遗传规则的操控，决议HLA型的基因在第6对染色体上。每个人别离可从爸爸妈妈取得一套染色体，所以能够一同查出A、B、C、D和DR5个系列中的5～10种白细胞型，因而表现出来的白细胞型有上亿种之多。在无血缘联系的人之间找出两个HLA相同是很困难的，但同胞之间则有1/4的几率。因而，在做亲子判守时，HLA测定是最有力的东西。

3.3输血

为了有用运用血液，现在发起成分输血疗法。HLA同型输血，可大大进步效果。因而血站应树立供血者的HLA信息体系，以便于查询运用。

3.4人类学研讨

各种HLA呈现的频率具有显着的种族差异。例如高加索人种中，LA-A-A30和B42抗原的呈现频率比较低。因而，HLA体系是人类学研讨的一个重要目标。

3.5疾病确诊

HLA与不少疾病相关联，具有某种HLA抗原的单个患某种疾病的比率较其他人要高。例如，HLA-A2抗原阳性者患先天性心脏病的比率较高。［10］

现如今，跟着我国综合国力的增强及医学分子生物学技能的广泛运用，专家们正在建造和展开我国造血干细胞捐赠志愿者材料库，这为我国人群HLA遗传学研讨供给了绝佳的良机，也为免疫遗传学研讨的搭建了很好的渠道。研讨成果的运用，除促进输血医学的展开外，一同也为临床医学、遗传学、麻醉学、病理学、法医学、人类学、犯罪学等学科的展开，作出了重大贡献。

参考文献：

［1］丁振若，于文彬，苏明权等.现代查验医学［M］.北京：公民军医出版社，2007.

［2］杨锋.错综杂乱的白细胞血型［J］.健康，2000.1：36.

［3］勇.马学严.有用血液免疫学血型理论和试验技能［M］.京：科学出版社，2006.

［4］刘越，米佳，黄耀江.人类白细胞抗原基因研讨开展［J］.生物学教育.2007.32,11：2-4.

［5］刘道安.天津发现人类白细胞抗原新等位基因.我国医学论坛报.2007.3.

［6］陈慰峰.医学免疫学,第四版［M］.北京：公民卫生出版社，2007.

［7］何维.医学免疫学［M］.北京：公民卫生出版社，2006.

［8］郑文芝. 临床根底查验学［M］.北京：公民军医出版社，2006.

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[要害词] 白细胞滤器； 去白细胞血液； 输血反响

[中图分类号] R457.1[文献标识码] A[文章编号] 1005-0515,2011-07-093-01

我站研讨制备了去白细胞血液制剂，并重复进行了质量检测，查询剖析了临床运用状况，取得了十分满足的效果。

1 白细胞去除办法 白细胞可选用多种办法去除，首要有离心去白膜法、洗刷法、冰冻去甘油法、过滤法、照射法，其间过滤法最为抱负[1]。本文详细介绍用第3代白细胞滤器和无菌接的办法，去除贮存前全血、悬浮红细胞中白细胞技能。

1.1 材料 (1)血液来历：用CPDA血袋收集的全血(规范为200、400ml/袋)或悬浮红细胞制剂(规范为1个单位/袋)，收集后置2℃～6℃条件下保存4～24 h。(2)耗材：一次性白细胞滤器，由成都双流双陆医疗器械有限公司供给。(3)设备：低温大容量离心机：由美国贝克曼(Backman)公司供给；无菌接口机：由德国进口驳接机公司供给；热合机：由姑苏医疗器械有限公司、韩国进口热合机供给。

1.2 制备办法 (1)全血过滤：用CPDA血袋收集的200ml或400ml全血(收集后1-5d)，经过无菌导管衔接器将收集的血液与白细胞过滤器相连，衔接成功后,将血袋悬挂于支架上，依重力效果天然过滤，待彻底过滤后(过滤时刻大约6-10min)扫除空气，对接配血管及打印标签，核对无误后，热合下过滤后的血袋，此即为制备的去白细胞全血。(2)悬浮红细胞制剂的过滤：用ACD B联袋收集血液，规范为200或400ml全血(收集后1-5d，经过离心(离心转数为3500r/min，离心时刻为10min，离心温度为4℃)，去除上层血浆即得红细胞制剂。经过无菌导管衔接器将装有红细胞制剂的血袋与白细胞过滤器相连,衔接成功后，将血袋悬挂于支架上，依重力效果天然过滤，待彻底过滤后(过滤时刻大约5-8min)扫除空气，对接配血管及打印标签，核对无误后，热合下过滤后的血袋，此即为制备的去白细胞悬浮红细胞。

2 临床运用查询

2.1 病例来历 挑选自2008年1月至2010年12月期间，在许昌市各大医院住院医治的患者，临床查询输血人次36328,既往有屡次输血史(2-4次)，并产生过两次或两次以上发热反响者共23例，占0.0633%,其间男9例，女14例，年纪9-62岁，这些病例中，急性白血病2例，缓慢粒细胞白血病4例，再生妨碍性贫血2例，尿毒症3例，全身烧伤1例，肝硬化3例，失血性休克2例，产后大出血2例，上消化道出血4例。

2.2 查询办法 上述患者再次输注血液时，运用白细胞滤器过滤的去白全血或去白悬浮红细胞，输注前用地塞米松等抗过敏药物。输血的输注速度依据临床实际需求，由专人担任查询记载患者，输血前后的临床反响。输前30min，输中30、60、90、120min，输后30、60min别离测患者体温，脉息、心率、血压。查询是否有其他不良反响产生。

2.3 点评办法和规范 输血中或输血后立刻呈现下列症状之一的，即断定有输血反响，体温升高1℃，并高于38℃(扫除其他疾病所引起的体温升高)，显着畏寒，肉眼可见的皮疹，血压下降、胸闷、呼吸困难，未呈现上述症状者为无输血反响。

2.4 查询成果 输注未去白细胞血液制剂与输注过滤制备的去白血液制剂引起发热反响率比较：23例患者既往共输注血液制剂92例次(包含全血、悬浮红细胞、洗刷红、血小板等)。共产生发热反响5例次，反响率为5.43%。现输注去白血液制剂，(去白全血、去白悬浮红细胞)23例共输注210例次，发热反响(以输血前后体温上升≥1℃为规范)共1例次，此例上消化道出血患者输血后体温升高2℃以上，并呈现胸闷气短等症状，产生输血反响率为0.047%。与输注未去除白细胞血液制剂的发热反响率比较显着下降(P＜0.05)。

3 评论 据计算有2%-10%的输血患者可能产生轻重不等的输血反响，而发热反响又是其间最常见者，约占输血总反响率的24%-44%[2]。其产生的原因首要有两个方面，一是采血、别离、输血用具和保存液污染了热源或细菌，因为现代化工业集中产生输血用具及制剂此状况已得到了较好的操控；二是因为因屡次承受输血或妊娠产生了白细胞抗体或血小板抗体，今后再次输注含有白细胞的血液制剂，产生抗原抗体反响而引起发热[3]。咱们经过临床运用查询，23例患者曾经产生过发热性输血反响为5.43%，输注成都双流双陆医疗器械有限公司开发研发的白细胞滤器过滤制备的去白细胞血液制剂，产生输血反响为0.047%，并且1例患者输注去白全血或去白悬浮红细胞制剂产生了输血反响，而后来改用洗刷红细胞制剂时，不再产生输血反响，说明产生反响的原因是对血浆蛋白过敏有联系。所以我站制备的去白细胞血液制剂可有用地防备和下降非溶血性输血反响的产生。此办法操作简洁并对受血者既安全又无毒副效果，特别适用于需常常重复输血患者、妊娠妇女、预行器官移植患者、既往有过输血反患者，在临床具有较高的有用价值[4]。

参考文献

[1] 赵树铭,林武存,刘景汉.白细胞去除及临床运用开展[J].我国试验血液学杂志,2002,10(5):478-482.

[2] 刘景汉.欧阳锡林.去白细胞输血根底和临床运用研讨开展[J].我国输血杂志,2001,14(4):252-255.

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要害词：白细胞削减　病因

临床材料

1997年6月～2007年6月以“白细胞削减症”收住院122例患者，男48例，女74例，年纪14～86岁，均契合下述确诊规范：屡次血惯例查看白细胞

化学物质及药物、物理要素所构成的者为38例(32％)，其间肿瘤化、放疗后所构成的者为20例，氯霉素所构成的3例，异烟肼所构成的2例，苯妥英钠所构成的1例，抗甲状腺药丙基硫氧嘧啶、他巴唑所构成的4例。运用头孢菌素类所构成的4例，长时刻触摸苯类所构成的2例，消炎痛及保泰松所构成的各1例；骨髓查看32例，表现为粒细胞增生正常或轻度低下，其间粒细胞缺少时。粒细胞

定论：白细胞削减症病因首要为继发性，多见化学药物、物理要素，其他依次为感染、血液体系疾病、脾功用亢进、恶性肿瘤、结缔安排病、年老体弱长时刻伴缓慢病者，单个患者病因不明，考虑为原发性。

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【要害词】 洛汀

【要害词】 洛汀新; 白细胞削减

1病例陈述

男，32岁. 因头痛、头晕1 a，加剧10 d，于20050424来我院门诊就诊，血压为21.3/10.7 kPa(1 kPa=7.5 mmHg)，查体未发现显着反常. 在我院行心电图查看正常，心率67次/min；胸片正常；双肾动脉、双肾、双肾上腺彩超均未见反常；血惯例,白细胞为6.7×109/L，中性粒细胞为4.2×109/L、尿惯例、肝肾功用、血脂、血糖、电解质、尿17羟均正常；有高血压宗族史；20050427在福建省协和医院行同位素查看未发现嗜铬细胞瘤征象. 确诊原发性高血压，于20050430开端给予洛汀新,诺华制药，批号0506010 mg，口服，qd，2 wk后复诊，血压18.9/10.1 kPa，无咳嗽，无双下肢水肿，肝肾功用、血脂、电解质均正常，但血惯例提示白细胞为2.8×109/L，中性粒细胞为1.9×109/L，否定服药期间触摸化学物质、放射性物质及服用其他药物. 考虑白细胞削减可能与服用洛汀新有关，嘱患者停用洛汀新，并留意防备伤风、外伤，避免不干净食物，2 wk后复查血象提示白细胞为4.3×109/L，中性粒细胞为3.2×109/L，20050706复查血象提示白细胞为5.8×109/L，中性粒细胞为4.1×109/L.

2评论

洛汀新,Lotensin，贝那普利，苯那普利为近年来逐步成为干流用药的血管严重素转化酶按捺剂(ACEI)，在高血压、缓慢肾功用不全患者中有着广泛的运用，其常见的不良反响为咳嗽,与缓激肽水平增高有关、低血压,与药物过量或适应症/禁忌症未把握好有关、血管神经性水肿,与缓激肽或其代谢产品有关、高血钾,与合用保钾利尿药有关等［1-3］. 研讨以为，含有SH基团的ACEI如卡托普利可能会呈现白细胞削减，且仅见于肾功用妨碍者，特别是有免疫妨碍或运用免疫按捺药者，不归于过敏反响，可能与骨髓按捺有关［4-5］.可是有文献报导，2例尿毒症患者在服用洛汀新之后呈现了白细胞削减，给予升白细胞药物并对症医治后白细胞康复正常，但洛汀新并不含有SH基团，且两位患者同期没有服用免疫按捺剂［6］.而本例患者除高血压外无其他根底疾病，也没有致白细胞削减的理化要素触摸史以及相关药物的服用史，却仍然呈现白细胞削减且停药后康复，确定为洛汀新引起.药物导致白细胞削减的机制较为杂乱，咱们以为，在临床上不能机械地依据已有文献决然扫除，需求结合实际，恰当调整，方能确保用药的安全性、有用性.一同，在药物运用的初期，作为药物安全性的监测，定时复查血象是十分必要的，一旦血象呈现显着的反常，应考虑到ACEI，这对一同服用多种药物的患者尤为重要.

参考文献

［1］ 陈修， 陈维洲， 曾贵云. 心血管药理学［M］. 3版. 北京:公民卫生出版社， 2002:352-353.

［2］ Sauer WH， Baer JT， Berlin JA， et al. Class effect of angiotensin-converting enzyme inhibitors on prevention of myocardial infarction［J］. Am J Cardiol， 2004，94(9):1171-1173.

［3］ Pines A， Fisman EZ. ACE Inhibition with moexipril: a review of potential effects beyond blood pressure control［J］. Am J Cardiovasc Drugs， 2003，3(5):351-360. 转贴于

［4］王晓红， 焦允生.口服卡托普利致急性粒细胞削减1例［J］.我国医院药学杂志，1996，16(4):188.

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【要害词】

白细胞去除；过滤法；红细胞制品

自1998年10月1日《献血法》施行以来，国家已全面推广成分用血，成分输血具有效果好、副效果小、节省血液资源以及便于保存和运送等长处［1］，全国各地活跃推广，本站推广去白细胞的红细胞，旨在确保临床用血安全，削减输血反响。

白细胞作为血液细胞中的一种重要成分，在机体防护外来病原体与抗原侵入等免疫功用中起着重要效果。可是，血液中白细胞传达病毒的危险性最大。近代医学研讨标明，血液中非医治性成分如白细胞等是一种“污染物”，其同种异体输注会产生白细胞抗体，引起一系列不良反响如非溶血性发热性输血反响(FNHTR)、HLA同种异体免疫反响、血小板输注无效、输血后移植物抗宿主病(GVHD)等［2］。一同白细胞仍是一些嗜白细胞病毒如巨细胞病毒的载体，输注含白细胞的血液制剂具有感染这些病毒的危险。因而，去除白细胞对输血安全和临床医治具有重要效果。

我站自2010年1月开端对运用过滤法去除白细胞技能进行了试验和研讨，与曩昔离心法进行比较，现陈述如下。

1 材料与办法

1.1 材料来历 山东威高集团医用高分子制品股份有限公司出产的血站型一次性运用去白细胞四联血袋。出产许可证号：鲁Hb20050181，用前批批查看。

血液由我站收集供给，全血200~400 ml／袋。

1.2 办法

1.2.1 办法Ⅰ 过滤法 用血站型四联袋收集血液，将血袋悬挂于支架上，依重力效果天然过滤，让血液全速充溢滤头进血端，下端开端滤出血液后开端调理速度，速度以250滴/min最佳。

1.2.2 办法Ⅱ 离心法 用大容量低温离心机在必定温度、时刻、转速的状况下，离心血液，去除白膜。

别离留取两种办法去白细胞前后血标本，一同做白细胞计数、红细胞计数。用计算学办法处理各项检测目标，计算出白细胞去除率、红细胞回收率。

2 成果

①过滤法白细胞去除率(97.8±3.2)%，红细胞回收率可达(89.5±5.0)%；②离心法白细胞去除率(65.8±12.5)%，红细胞回收率达(86.9±8.5)%；③经试验证明过滤法最为抱负。

3 评论

跟着医疗技能水平的不断进步，临床输血和成分输血医治规模日益扩展，人们愈加剧视血液质量、输血效果和输血安全。输血常常会引起输血反响，首要有：细菌污染输血反响(血液及器件被污染)、溶血性输血反响(血型不合)和非溶血性输血反响。经过选用一次性采血、输血器件，污染构成的输血反响简直已被根绝；选用单克隆技能和严厉进行穿插配血，溶血性输血反响已很少产生；而非溶血性输血反响的产生率却有添加的趋势。非溶血性输血反响首要是因为输入了供血者含有白细胞的全血或血液成分所引起，白细胞是某些病毒和病变物质的附着体，临床上因输入白细胞导致的穿插感染也时有产生［3］。咱们从以上成果能够看出，用过滤法能高效去除白细胞，达(97.8±3.2)%。且红细胞回收率高。在去除了绝大多数的白细胞后，削减了相应的抗原白细胞的输注，削减了淋巴细胞毒性反响，然后进一步削减了输血反响的产生。经过临床运用，遍及反映过滤去除白细胞后的全血、红细胞制品质量较前显着好，血液外观色泽红，含氧度较前高，血液输注流通，无凝块阻塞。2010年因为过滤法的展开运用，为我市临床供给了高质量的全血、红细胞制品，为输血安全奠定了杰出的根底。

关于常常重复输血的患者运用去除白细胞全血、红细胞制品可起到医治的效果，而关于一些新的患者可起到防备体内产生HLA抗体的效果。去除白细胞全血、红细胞制品的运用，为临床进步输血质量、避免非溶血性输血反响供给了一条可供挑选的途径，特别是用于需求常常重复输血的患者、器官移植的患者、预行骨髓移植的患者。阻止白细胞过滤技能大规模运用的首要原因是费用问题。可是，尽管运用去除白细胞的全血、红细胞制品与运用没有去除白细胞的全血、红细胞制品比较，从受血者每次用血的价格看，如同费用在添加，但因为削减了输血反响、削减了手术后感染以及缩短住院时刻，医疗总费用可相应削减，更重要的是削减了病原体感染时机甚至下降了死亡率。因而，100％实施白细胞过滤正成为新的世界输血规范。

参考文献

［1］美国血库联合会(AABB)规范委员会.血库和输血组织规范.我国输血杂志，1997，10：13-17.

［2］陈志哲.警觉输血相关性移植物抗宿主病.中华内科杂志，1997，36：291-294.

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【要害词】三磷酸腺苷结合盒转运体A1 IL-18 IL-12 胆固醇流出

中图分类号：R34文献标识码：B文章编号：1005-0515,201110-009-03

Influence of IL-18 and IL-12 on Cholesterol efflux

JIANG Hailu1 LI Tong2

(1. Cardiovascular Institute of Nanhua UniversityHunan Hengyang 421001 ；2. Shenzhen Second People’s HospitalGuangdong Shenzhen 518036)

【Abstract】Objective IL-18 and IL-12, mainly produced by activated macrophages, are multifunctional cytokines which have been found to be excessively expressed in inflammatory atherosclerosis lesions.This study was to investigate the changes of cholesterol efflux, ATP-binding cassette transporter A1 (ABCA1) mRNA and protein expression in THP-1 macrophage derived foam cells after treated by IL-18, IL-12, or both, and to discover the combined effects and mechanisms of IL-18 and IL-12 on the down-regulation of ABCA1 in foam cells. Conclusions These findings suggest that combined treatment with IL-18 and IL-12 can down-regulate the expression of ABCA1 mRNA and protein, promote the accumulation of lipid and decrease cellular cholesterol efflux in THP-1 macrophage derived foam cells.

【Keywords】ATP-binding cassette transporter A1 IL-18R IL-12 Nucleus factor-κB Cholesterol efflux

白细胞介素18,IL-18和白细胞介素12,IL-12是具有多种生物学功用的炎症因子，近来发现两者在动脉粥样硬化,As斑块中过量表达。很多流行病学查询证明，血清IL-18水平与心血管疾病的危险呈正相关，提示IL-18介导了人体As病变的产生展开[1-3]。IL-12是一种与IL-18具有相似功用的炎性细胞因子，在As斑块中，IL- 12与IL-18共表达[4]。本研讨查询IL-18及IL- 12效果下ABCA1表达及胆固醇流出的改变，为清晰炎症与RCT的联系供给新的理论依据。

1 材料与办法

1.1 细胞培育

THP-1细胞生善于含10%重生小牛血清的RPMI-1640培育液中，于37℃、5% CO2培育箱中静置培育。培育液中加10 mmol/L的HEPES、1.0×105μ/L的青霉素和100 mg/L的链霉素，取对数生长时刻细胞进行试验。在每次试验前用160 nmol/L的佛波酯诱导THP-1细胞24 h，使其贴壁并转化为巨噬细胞。

1.2 胆固醇流出试验

胆固醇流出检测按本试验室的惯例办法进行，THP-1细胞用0.2μCi/ml[3H]胆固醇在含有10%小牛血清RPMI-1640培育液一同孵育待细胞长至85%时，用PBS液洗刷细胞，置含脂蛋白的无血清RPMI-1640培育液中培育24小时。PBS液洗刷细胞，闪耀液裂解细胞后，用闪耀计数法检测培育液和细胞中的[3H]胆固醇。胆固醇流出率用培育液中CPM除以总CPM(培育液CPM+细胞CPM)，再乘以100%来标明。

1.3 高效液相色谱剖析

待细胞处理完毕后，弃培育基，PBS洗3遍，参加细胞裂解液200μl，重复冻融3次裂解细胞，BCA法定量蛋白后，7.2%三氯乙酸沉积蛋白，800×g离心10min，取上清进行胆固醇检测,以豆甾醇为内标。取100μl上清液，参加8.9mol/L氢氧化钾溶液200μl，水解胆固醇酯后为细胞内总胆固醇检测样品。各样品别离与内标液混匀，用正己烷和无水乙醇抽提后，1.5mol/L的三氧化铬进行氧化衍生并真空枯燥，100μl 乙晴-异丙醇,80:20溶解样品，上样于高效液相色谱仪。选用C-18柱，柱温4℃，流速1mL/min，250nm紫外光检测，胆固醇以峰面积定量，内标校准，以mg/g细胞蛋白为单位。

1.4 细胞白的提取

弃去培育基，用冰浴PBS,含PMSF洗刷细胞三次，用细胞刮子从培育瓶壁上刮落细胞后收集到离心管中，1000转离心5分钟，去上清液，加1ml冰浴PBS,含PMSF，洗刷沉积，并将细胞移至Ep管，4℃ 14000转离心5min，弃上清，参加400μl冰冻的缓冲液A,10mM Hepes,1.5mM Mgcl2,10mM Kcl,1mM DTT,0.5%Np-40,100μg/ml PMSF将细胞重悬，用移液枪将匀浆吹吸15-20次，冰上静置15min后。4℃ 14000转离心20sec，沉积用冰浴缓冲液A洗一次，用不含Np-40的缓冲液A洗一次，同上办法离心，沉积从头悬浮在0.5倍体积的冰浴缓冲液C,20mM Hepes,1.5mM Mgcl2,420mM Nacl,1mM DTT,0.2mM EDTA,100μg/ml PMSF中。样品用旋涡振动仪，振动20分钟，14000g离心20秒，上清含细胞核提取物，放置于新的Ep管，参加等体积的冰浴缓冲液D,20mM Hepes(pH7.9), 100mM Kcl, 20%甘油, 1mM DTT, 0.2mM EDTA, 100μg/ml PMSF，当即冰冻－80℃保存。运用时，样本与SDS缓冲液一同煮沸后，-20℃ 保存备用。

1.5 计算学剖析

试验所得数据选用均数±规范差,x±s标明。用SPSS 12.0进行计算处理，组间比较选用方差剖析及t查验, 以P＜0.05断定差异的显着性。

2 成果

2.1 IL-18对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达的影响

THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞经不同浓度,0，2，20，200 ng/mlIL-18处理24h后，提取细胞总RNA和蛋白，经过实时荧光定量PCR和Western blot测定细胞内ABCA1基因和蛋白质表达的改变。成果显现，用IL-18独自处理细胞，ABCA1 mRNA和蛋白表达无显着改变,图1。

图1 不同浓度IL-18对ABCA1 mRNA表达的影响,n=3

*P＞0.05 vs 0ng/ml组

2.2 IL-12对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达的影响

THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞经不同浓度,0，0.2，2，20 ng/mlIL-12处理24h后，提取细胞总RNA和蛋白，经过实时荧光定量PCR和Western blot测定细胞内ABCA1基因和蛋白质表达的改变。成果显现，用IL-12独自处理细胞，ABCA1 mRNA和蛋白质表达无显着改变,图2。

图2 不同浓度IL-12对ABCA1 mRNA表达的影响,n=3

*P＞0.05 vs 0ng/ml组

3 评论

近年来，越来越多的研讨证明动脉粥样硬化,As具有缓慢炎症疾病的病理生理进程，在As斑块中很多的炎性细胞滋润和炎性因子的表达促进斑块的产生、展开和决裂[5]。流行病学查询研讨显现，高密度脂蛋白,high density lipid，HDL水平与As相关的心血管疾病的危险呈负相关，其首要抗As的机制与HDL促进胆固醇逆向转运,RCT有关[6]。RCT是将外周胆固醇转运到肝脏进行代谢的进程，其间HDL的首要成分载脂蛋白A-I,apolipoprotein A-I，apoA1-I经过ABCA1促进巨噬细胞内胆固醇流出是RCT的要害环节[7]。最近的研讨显现，炎症反响按捺体内RCT，可能为炎症促进As供给理论根底。可是，炎症影响RCT的详细机制还有待进一步说明，其间炎症状态下脂质转运体ABCA1的表达改变可能是其要害机制[8-9]。ABCA1的表达遭到多要素多水平的调控。在转录水平，多种促炎细胞因子，如TNF-α[10]、IL-1β[11]、C反响蛋白,CRP[12]和IFN-γ[13]等经过LXR下调ABCA1的表达，然后按捺胆固醇的流出。在转录后水平，促炎蛋白，如LPS[14]、EPA[15]、钙蛋白酶[16]和钙调蛋白[17]等经过下调ABCA1的稳定性促进其降解，这些研讨提示炎症状态下ABCA1的表达遭到多种要素调理。

IL-18和IL-12是在As斑块中过量表达的炎症细胞因子，两者的水平与心血管疾病的危险呈正相关[18-20]。IL-18归于IL-1超宗族成员，现在以为其是内源性和取得性免疫炎症反响的重要调理子[21]。IL-12由IL-12p40、IL-12p35两个亚基组成的，其间IL-12p35遍及表达于各类细胞，而IL-12p40首要表达于免疫细胞。在停止状态下，各种细胞中的IL-12p35是很微量的，在免疫反响时，IL-12p40可很多组成[22]。IL-12具有相似于IL-18的功用，对IL-18的生物学功用具有协同效应，两者的协同效果关于诱导IFN-γ等炎症因子的表达[23, 24] 、发动Th1反响[25, 26]和树突状细胞,DC老练[27, 28]等具有重要效果。尽管IL-18开始的功用被以为与诱导IFN-γ有关，可是最近的研讨显现IL-18具有多种促As的功用。生理状态下，IL-18及其受体首要在血管滑润肌细胞和内皮细胞表达，炎症细胞表达IL-18R相对较少。但在As斑块中IL-18及其受体过量表达，特别在巨噬细胞中表达显着。在血管滑润肌细胞、内皮细胞和巨噬细胞中，IL-18诱导IL-6、IL-8、ICAM-1和基质金属蛋白酶,MMPs的表达，并且，与IL-12一同效果后，IL-18能促进滑润肌细胞IFN-γ的表达，这些效果关于As的构成具有重要意义[29]

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篇7

1材料与办法

1.1一般材料 本组85例中，50例男性，35例女人。年纪20～75岁，均匀49岁。其间50例急性髓细胞性白血病,AML，45例急性淋巴细胞性白血病。

1.2办法 AML运用DA，HA高剂量阿糖胞苷医治，一切与COAP，HDMTX +亚叶酸钙，米托恩醌等。85例大剂量化疗后，呈现不同程度的骨髓按捺：有49例白细胞小于0.5×109/L，20例白细胞小于1×109/L，16例白细胞小于2×109/L。一般医治的细胞缺少的白细胞康复正